蛋白质纯化紫外线吸收法中紫外线强度检测

凤凰火

蛋白质纯化是指将一种或多种蛋白质从复杂混合物中分离出来的一系列过程。蛋白质的分离纯化广泛应用于生化研究，是一项重要的生物研究技术。一个典型的真核细胞可以包含成千上万种不同的蛋白质，为了研究某种蛋白质，必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。

蛋白质的纯化要用不同蛋白质间内在差异和相似性去除非蛋白质中的污染，用蛋白质的差异从其他蛋白质中纯化出需要的蛋白质。因为每种蛋白质的大小、形状、电荷、疏水性、溶解性和生物活性都是不同的，利用这些差异可以从混合物中提取如结肠细菌的裂缝。

在蛋白质和抗体的纯化工作中，准确地进行定量是很重要的，通过测定蛋白质的紫外吸收情况来测量是目前较为快速方便的一种方法。

蛋白质所具有的紫外吸收特性来自于含有共轭双键的色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸分子，在280纳米附近有最大的光吸收峰。因为大多数蛋白质含有酪氨酸和色氨酸残基，在280纳米波长下测定蛋白质的吸光度是分析溶液中蛋白质含量的最快和最简单的方法。

紫外吸收法测定蛋白质含量的优点是快速、简单、不消耗样品、低浓度盐类不干扰。但是，这种方法存在一定的缺点，例如在确定那些与标准蛋白质中酪氨酸含量和铬含量不同的蛋白质时会有一定的误差和干扰。

不同的蛋白质和核酸对紫外线的吸收是不同的。即使经过校正，测量结果仍有一定误差，但可以作为初步定量的依据。测量过程中也需要对紫外线强度进行监测，工采网推荐使用紫外光电探测器和紫外线传感器：

德国SGLUX 紫外光电探测器 - TOCON_ABC10，基于碳化硅的宽频紫外光电探测器放于TO5 外壳中，带有衰减器，高度现代化的电子元件和带有紫外玻璃窗的密封金属外壳可消除封装内寄生电阻路径导致的噪声或电磁干扰。

韩国GENICOM 可见光传感器/紫外线传感器 - GVBL--T12GD，具有良好的温度稳定性，可以完全屏蔽UVC和UVB波段的紫外线。由于该紫外线-可见光传感器在太阳光下会有输出，故使用时应注意避免有环境光的干扰。